一、制備方法
1、材料準(zhǔn)備
先要選擇合適的載體材料，這是構(gòu)建免疫親和柱的基礎(chǔ)框架。瓊脂糖凝膠具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度，能夠穩(wěn)定地固定生物分子。同時(shí)，還需要準(zhǔn)備生物分子，其質(zhì)量和純度直接影響免疫親和柱的性能。 對(duì)于載體的預(yù)處理，在制備過程中，像SPA蛋白偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠載體上時(shí)，需要準(zhǔn)確配置偶聯(lián)緩沖液，確保反應(yīng)條件適宜。
2、偶聯(lián)過程
將生物分子偶聯(lián)到載體上是一個(gè)關(guān)鍵步驟。以抗乳鐵蛋白抗體與瓊脂糖上的SPA蛋白偶聯(lián)為例，在將SPA蛋白與活化后的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)時(shí)，要嚴(yán)格控制反應(yīng)條件。
在整個(gè)偶聯(lián)過程中，要優(yōu)化偶聯(lián)條件，包括偶聯(lián)溫度、時(shí)間和緩沖液成分等。
3、后處理工作
偶聯(lián)完成后，需要進(jìn)行清洗步驟。用特定的緩沖液多次沖洗，以去除未結(jié)合的生物分子。然后進(jìn)行活性基團(tuán)的封閉，將介質(zhì)重懸，室溫溫和混勻后抽干。再進(jìn)行一系列的酸堿清洗，用乙醇浸泡保存。
二、操作技巧
1、使用前的準(zhǔn)備
使用前要將免疫親和柱恢復(fù)至室溫，這是因?yàn)闇囟葧?huì)影響抗原-抗體的反應(yīng)效率。同時(shí)，要放掉柱子中的保護(hù)液。并且要檢查柱子的完整性，如查看柱管是否有破損，篩板是否堵塞等情況。
2、上樣過程
上柱的樣品溶液要保持酸堿中性、無(wú)懸浮物，并且甲醇濃度不宜過高。樣品流速要控制，不宜過快，過快的流速可能導(dǎo)致樣品與親和介質(zhì)接觸不充分，影響捕獲效率。
3、淋洗和洗脫過程
淋洗時(shí)要選擇合適的淋洗液，洗脫時(shí)，一般選擇甲醇作為洗脫溶劑，洗脫速度要慢且均勻。
4、其他注意事項(xiàng)
不要在無(wú)水狀態(tài)下，以免瓊脂干燥。儲(chǔ)存時(shí)要保持在特定溫度的環(huán)境中，不宜過低，防止緩沖液凍結(jié)影響親和柱質(zhì)量。并且在使用過程中要做好過程空白，以排除本底干擾。
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